綠色植物中葉綠素含量是測定植物所需氮含量的重要因素，是植物進行光合作用的關鍵因素，因此對植物的生理學研究也是個重要的考核指標。葉綠素測定儀通過測量葉片在兩種波長范圍內的透光系數(shù)來確定葉片當前葉綠素的相對數(shù)量,也就是在葉綠素選擇吸收特定波長光的兩個波長區(qū)域，根據(jù)葉片透射光的量來計算測量值。

葉綠素測定儀的測定原理是根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質濃度C和液層厚度L成正比，即A=αCL式中：α比例常數(shù)。當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時，α為該物質的吸光系數(shù)。各種有色物質溶液在不同波長下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質在不同波長下的吸光度而求得。

若測定葉綠體色素混合提取液中的葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)可求得其濃度。在測定葉綠素a、b時為了排除類胡蘿卜素的干擾，通常用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的大吸收峰。